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今天和主任聊天

沒想到 她去日本出遊 認識了中醫師

醫師推介她去做..冷凍卵子

聽起來就十分嚇人

但主任很怕之後自己一直是一個人

很瞎的是..頻頻跟我說

以後一定要帶小朋友去看她

哇哩咧 我是生了哦..連結都還沒個影

想那麼遠...

查了一下資料 現在真的什麼都有

只能說生化科技 實在太猛了..



冷凍卵子的進展
陳思原 臺大醫院婦產部


自1986年澳洲Dr.Chen首次報告卵子冷凍合併體外受精成功懷孕的例子後,約有十年的時間卵子冷凍並沒有明顯之進展。這幾年來在國內外學者的努力研究下,在技術上以及學理上已有長足的進步,成功率大為提高。

目前改進存活率之方法最常是用改良式慢速法,提高蔗糖濃度及脫水平衡時間,並且解凍之步驟亦有改良。義大利Fabbri報告改良式慢速法以1.5 M 1,2-propanediol (PROH) 加0.3M蔗糖做卵子冷凍,存活率達82%,而0.2 M蔗糖 (60%)、0.1 M蔗糖 (34%)。使用改良式慢速法可增加脫水能力,減少冰晶形成,緩和解凍滲透壓之變化。

成熟卵子是處於第二次減數分裂之中期,含有組織嚴密之減數分裂紡綞體,而染色體排列於中間之平面。此紡綞體在受精時卵子完成第二次減數分裂,排出第二極體有很重要之角色。卵子冷凍及解凍會造成紡綞體之傷害,幸而放回培養箱後會慢慢回復正常。我們曾應用老鼠卵子做研究,發現在解凍後兩小時或三小時紡綞體正常者,較解凍後一小時高,受精率及胚胎成長能力也較好。卵子解凍後受精的結果和紡綞體之恢復與否有密切之關係,如果紡綞體未恢復,則會造成異常受精,第二極體不能排出,形成多核受精,或造成染色體數目異常,也會造成胚胎進一步分裂能力受阻。因此解凍後在保溫箱培養一段時間,讓紡綞體恢復再做受精,可提高正常受精及胚胎分裂能力。根據前面之研究,我們建議解凍之人類卵子,培養三小時,再進行受精。Rienzi等人使用Polscope觀察解凍後之人類卵子,發現剛解凍時紡綞體未能觀察到,而於培養箱三小時後則可觀察到,和我們的老鼠實驗有相近之發現。

但如果解凍太久才做受精,也必須考慮卵子老化之問題。當一個新鮮的卵子取出後,其最適當的受精時間,根據Dozortsev等人之研究為hCG注射後37-41小時。因此做卵子冷凍的治療時須同時考慮兩個因素,包括卵子代謝老化及紡綞體的問題。我們建議在hCG注射後34小時取卵,36小時冷凍,脫水冷凍過程約於30分鐘時,溫度會下降至零度以下,此時應屬代謝停止狀態。然後繼續降溫、保存於液態氮桶內。

解凍時之步驟於室溫狀態約30分鐘,放回保溫箱三小時讓紡綞體回復,再進行受精。因此把整個過程的時間總合起來,約於hCG注射後40小時進行受精,依此原則去做可兼顧卵子代謝老化及紡綞體的因素。

經過三年左右之動物實驗後,自2001年九月,臺大醫院人工生殖研究室開始實施人類卵子冷凍保存的計畫,採用Fabbri等人發展的0.3 M蔗糖濃度慢速冷凍方式,我們選擇於解凍後三小時實施精蟲顯微注射,以期讓紡錘體有時間恢復正常。卵子存活率為75%,正常受精率67%,分裂率91%。有27名患者冷凍保存的卵子已經解凍, 9名懷孕(33%),8名成功懷孕(31%),1名流產(11%)。

2004年起,美國紐約大學Noyes 等人比較Fabbri慢速冷凍及玻璃化冷凍,他們是用麥管做玻璃化冷凍,於解凍後三小時後以精子顯微注射受精,發現其存活率為86% vs. 83%;受精率為76% vs. 62%,分裂率為97% vs. 48%,桑椹期/囊胚期比率為66% vs. 43%。由此初步結果看來,用麥管做玻璃化冷凍之受精率及分裂率較慢速冷凍差,在混合植入5個週期中,著床率28%,3位懷孕、2位(40%)繼續懷孕。

義大利Antinori 等人使用15%EG, 15%DMSO, plus 0.5 M sucrose 及Cryotop 做玻璃化冷凍,於解凍後兩小時做精子注射,共解凍35個卵子,其存活率為91%、受精率為93%、分裂率為90%、懷孕率38% (5/13)。由此看來玻璃化冷凍亦有長足之進步與改進空間。

有學者發現哺乳類卵子冷凍保存時會使皮質顆粒(cortical granule) 提早釋出,造成透明帶硬化,進而影響精子的進入及受精。但是也有學者認為冷凍過程並不會使皮質顆粒提早釋出。Kazem等人發現精蟲顯微注射應用於冷凍卵子,其受精率比一般的體外受精還要高;但是Gook等人的報告則是兩者受精率差不多。即便如此,近年來精蟲顯微注射還是廣泛應用於冷凍卵子。研究人類卵子使用Fabbri慢速冷凍之方法,解凍後做皮質顆粒檢查,發現並無明顯之變化,而在臨床上亦發現使用精蟲顯微注射與傳統體外受精之受精率與分裂率並無明顯之差別,然目前數目並不多,仍須更多之研究來釐清精蟲顯微注射是否為必要角色。

卵子冷凍較胚胎冷凍有更廣的應用範圍,它可提供未婚患者但可能因手術、化學治療、或放射線治療等原因失去卵巢機能的病人。目前文獻上對於癌症病人保存成熟卵子之報告有三篇。

年齡是影響女性生育能力的一大因素,年紀大時卵子數目減少,品質變差,胚胎生長分裂的能力下降,因此不容易著床懷孕。現在的婦女由於結婚年齡較晚,罹患子宮內膜異位症之機率較高。對於這些婦女如果能在卵巢機能未下降或受到嚴重傷害前,將卵子冷凍起來,將來結婚後如果沒有足夠品質好之卵子時,可解凍卵子來達成受孕之目的,將可幫助她們達成生兒育女之心願。但是ASRM對於卵子冷凍於2004年仍採保留態度,認為仍屬實驗性質,但近來美國亦有些著名醫院積極發展卵子冷凍之臨床應用。

另外如某些國家法律之規範、或宗教上的觀念,限制應用胚胎冷凍,但允許做卵子冷凍。義大利已經立法禁止胚胎冷凍,規定新鮮卵子最多3個進行受精、植入,其餘之卵子冷凍起來。但此規定亦引起很大之爭議,有些醫師認為現階段卵子冷凍仍未如胚胎冷凍之成功率,或有些精子很少之病人,例如睪丸取精者,較適合胚胎冷凍;但Porcu等人則報告其累積懷孕率約為48%,認為卵子冷凍經驗愈多,卵子冷凍之成功率將接近胚胎冷凍。我們比較成熟卵子冷凍與受精卵冷凍之存活率、分裂率、著床率、及懷孕率,發現兩者相當接近並無明顯之差異。美國Boldt等人比較成熟卵子冷凍與分裂期胚胎冷凍,亦有相同之發現。但數目仍不多,須更多之研究才能證實此結果。

接受試管嬰兒治療的患者,如果將刺激排卵所得過多的卵子冷凍保存,除了可以自己將來使用外,也可成為卵子捐贈的來源。如果病人已成功懷孕生產,多餘之冷凍卵子可將來生下一胎用。如果不想再生了,經病人本人及配偶同意,可捐贈給卵巢機能喪失,需要卵子之不孕症夫婦,也是卵子分享之精神,提升卵子的使用效率,目前在這方面有4例成功懷孕生子報告。這對於像台灣禁止胚胎捐贈但可卵子捐贈的國家而言,卵子冷凍對不孕症治療更加重要。

在少數的情形下,有時做取卵手術後,精子無法獲得時,將卵子及時冷凍也是實驗室相當重要的一個應變措施。義大利Porcu等人有兩例之報告。

一般體外受精約有7%病人會發生沒有受精之情形,加入精子後卻沒有受精,卵子會老化,懷孕機會幾乎為零,卵子冷凍除了上述之優點外,另外可預防意外無受精之情形。如果新鮮之卵子未能受精,將來解凍卵子可採精子注射來增加受精機會。最近本院有一位這樣的例子,病人因為輸卵管不通接受體外受精治療,經排卵刺激及陰道取卵,取得20個卵子,其中有12個卵子體外受精,其先生精液檢查顯示正常,然而只有一個卵子達成正常受精,植入後可惜沒有懷孕。幸好當時有將多餘的8個卵子冷凍起來,在下一個週期將卵子解凍,經精子注射後達到成功之懷孕。

雖然至今使用冷凍卵子達成懷孕的例子仍不多,其先天性異常或染色體異常的機會並沒有增加。關於此問題有學者研究冷凍卵子受精後發育之胚胎染色體,發現並沒有增加異常的機會,但這些仍需要將來更多的研究與觀察。

卵子冷凍近年來已有長足的進步,將來應可漸漸佔有重要的地位,他可補助胚胎冷凍之缺點,希望將來更多的臨床應用能幫助更多需要此技術的婦女。


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